◎ lacz를 이용한 color selection
lac operon이란 박테리아에서 시행되는 유전자 발현 조절기구로 e.coli가 lactose를 galactose와 glucose로 분해하는데 필요한 효소인 β-galactosidase를 만드는 유전자이다.
lactose가 없을 때에는 inhibitor region에서 생성된 inhibitor가 promoter 영역의 operator부분에 결합하여 rna polymerase 가 활동하는 것을 방해하므로 불필요한 유전자인
β-galactosidase는 생성되지 않는다.
그러나 lactose 가 배지에 있으면 이 물질이 inhibitor와 결합하여 operator에 있는 inhibitor를 떼어내고 rna polymerase가 잘 작용하여 mrna를 만들고,β-galactosidase를 만들면서 lactose를 분해하게 한다.
이런 유전자 조절 기구를 실험에 이용하고자 하는 것이 바로 lacz인데 이 부분을 plasmid에 삽입해 놓게 되는데 이때 lacz operon이 동작하고 있는가 확인하기 위해서 iptg와 x-gal이라는 두 가지 물질을 사용한다.
▶ iptg
lacz gene inducer역할로 lactose대신 inhibitor와 결합하지만 분해되지는 않는다.
▶ x-gal (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-d-galactopyranosidase)
lactose 대신 β-galactosidase에 의해 대사되는 물질로 원래는 무색이지만
β-galactosidase에 의하여 대사되면 푸른색을 띤다.
◎ selection의 결과 결과)) ▶blue colony
lacz의 mcs(multiple cloning site)에 dna가 재조합되지 않은 박테리아의 colony는 lacz가 제 기능을 발휘하여 x-gal을 대사시키므로 푸른색이 된다
▶white colony
dna가 재조합된 박테리아의 colony는 lacz가 망가져서 기능을 하지 않아 x-gal이 그대로 남아있어서 흰색 colony가 된다.
⇒ 이러한 색깔의 차이로 우리가 원하는 유전자가 plasmid에 들어가
세포내에서 증폭되어 기능하는지 확인할 수 있다.
◎ 정 리
위의 자료들을 통해 lacz를 이용한 color selection의 내용을 알았으므로
white-blue selection에 대해 최종적으로 정리해 보자.
white colony blue colony
즉,ampicillin을 처리하여 먼저 colony를 형성 할 수 있는 것 과 형성하지 못하는 것으로 구분한다. 이것만으로는 우리가 원하는 유전자가 제대로 plasmid에 재조합 되었는지 알 수 없기 때문에 이 때 white-blue selection( lacz 이용한 color selection)을 이용한다
(이하 생략)
