1장 실험 날짜
2장 실험 제목
3장 실험 원리
4장 재료 시약 및 기구
5장 방법
6장 결과
7장 고찰
실험보고서
1.실험 날짜 : 2009년 5월 6일 수요일
2.실험 제목 : 혈중 콜레스테롤 측정
3.실험 원리
cholesterol esterase
혈청 중에는 유리형 및 에스터형의 콜레스테롤이 존재하며 에스터형에 cholesterolester hydrolase 효소를 반응시키면 유리형과 지방산으로 분해하고 유리형에 cholesterol 산화 효소를 반응시키면 h2o2와 4-δ-cholesterol이 생성된다.생성된 h2o2에 과산화효소와 4-아미노산티피린 및 phenol을 동시에 반응시키면 산화적 축합반응으로 키논이 생성되며 이를 비색하여 콜레스테롤을 정량하는 법이다.
peroxidase cholesterol oxidase
ester cholesterol > 지방산 유리형 cholesterol
h2o 4-δ-cholesterol
phenol 4-amino antipyrine(키논형 적색 색소나옴)
정상적인 혈청 중의 cholesterold 경우 xxxx. xx
xxmg/100mℓ 범위에 있다.
4.재료 시약 및 기구
시험관 4개, auto pipette, dry oven, water bath, vortex
uv/vis spectrophotometer
1)시약
콜레스테롤 완충액 효소시약(100ml 희석용)
콜레스테롤 기준액(calibrator)xxxx.xx.xxml300mg/dℓ
5.방법
효소용액조제 : 효소시약(100ml 희석용) 1병을 완충액 100ml에 용해시켜 사용하고 이 용액은 2~10℃에 보존하여 3주일간 사용할 수 있다.
1) 검체 1, 2에 혈청을 0.01ml씩 넣는다.
2) 표준 1, 2 시험관에 기준액 0.01ml씩 넣는다.
3) 효소시약을 각 시험관에 1.5ml씩 넣는다.
4) vortex로 혼합 후 37℃ water bath에서 5분간 반응시킨 후
1시간 이내에 검체 및 표준의 흡광도를 읽는다.(500nm)
6.결과
1회측정 2회측정 평균 검체
0.215 (이하 생략)
